基因工程抗體及其功能試劑
80年代后人們開始使用基因工程技術(shù)制備抗體，并進(jìn)而將抗體分子片斷與其它蛋白（或另一種抗體分子）融合得到多功能試劑，到目前為止，基因工程抗體在免疫測定上的應(yīng)用尚處于一個初級階段。且主要是將抗體與其它蛋白以融合蛋白形式表達(dá)而得到多功能試劑，如澳大利亞學(xué)者應(yīng)用基因工程技術(shù)制備了抗人紅細(xì)胞抗體與HIV-1gpN41的融合蛋白。這種重組蛋白，即基因工程雙功能試劑，在此基礎(chǔ)上，建立了快速，靈敏和特異的自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（AGEN）.
3.1 HIV-Elisa抗原/抗體試劑
1998年,美國首先研制第四代試劑,對檢測HIV的同時檢測P24（核心）抗原,故稱HIV抗原/抗體試劑,國內(nèi)已有引進(jìn).
抗原組成:gp160gp36gp170和單克隆抗p24抗體包被.
3.1.2 P24抗原測定
采用夾心法Elisa,即將將純化的已知抗體包被，當(dāng)加入帶測血清后，若血清中含有P24與包被抗體形成抗原抗體復(fù)合物，再加入酶（HRP）標(biāo)記HIV抗體。在抗原上又結(jié)合了酶標(biāo)記的抗體，加底物 顯色后在酶標(biāo)儀上讀結(jié)果。
近來為提高檢測血清中P24抗原的敏感性，將血清中免疫復(fù)合物（ICD）解離后再進(jìn)行測定。發(fā)展了（ICD） P24抗原測定技術(shù)。
3.1.3抗HIV-Elisa試劑
目前對HIV的檢測原料有了較大改進(jìn)，主要如下：
（1）可用于檢測血清或血漿中HIV IgM亞特異性抗體和檢測HIV-1、2和多種亞型。
（2）標(biāo)記的抗原：
a.含HIV-1B亞型gp41和P24的HIV-1重組融合蛋白。
b.可特異性檢測血清或血漿中HIV M群的抗體，絕大多數(shù)HIV-1.0群和HIV-2群的抗體。
c.gp36免疫調(diào)控區(qū)的HIV-2多肽可測定特異性的HIV-2抗體。
d.gp41的倆段HIV 1.0群多肽，可測特異性HIV 1.0 群的抗體 和HIV 1M群的抗體。
從以上抗原設(shè)計保證HIV的來自不同亞型/或區(qū)域的抗原亞型抗體的檢測。減少了變異株的漏檢。
HIV-1.0.2對759份各類臨床樣品包括401份HIV-1感染不同階段病人樣品，204分HIV-2感染不同階段病人樣品，和154份與HIV無關(guān)的其他疾病患者的樣品的檢測結(jié)果。
特異性：99.93% 靈敏度：100%
對歐洲血液中心的8842份常規(guī)鮮血者樣品用HIV-1.0.2進(jìn)行評價篩選，并經(jīng)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)獲得的結(jié)果。
3.1.4 HIV 確認(rèn)試劑—免疫印記（WB或RIBA）試劑
判斷標(biāo)準(zhǔn)
我國 HIV 抗體陽性：至少二條膜帶（即gp160/gp120）或至少一條膜帶和p24（核心）帶同時出現(xiàn)
美國 HIV-1陽性（任何兩個中有二條帶（P24 gp41 gp120/gp160）, HIV-2無陽性
WHO : HIV -1 陽性（不管有無核心帶或酶帶， 但有兩條膜帶）
HIV-2陽性（不管有無核心帶或酶帶，單有兩條膜帶即為陽性）
上一篇 細(xì)胞爬片的免疫組化染色的操作步驟 下一篇 ELISA試劑盒的種類分析
