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胚肺細胞VA13細胞;WI-38VA13亞系2RA
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  胚肺細胞VA13細胞;WI-38VA13亞系2RA的詳細資料:

公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹:

產品名稱

生長特性

貨號

胚肺細胞VA13細胞;WI-38VA13亞系2RA

貼壁生長

EY-X63630

細胞名稱  胚肺細胞VA13細胞;WI-38VA13亞系2RA
形態(tài)特性: 成纖維細胞樣

生長特性: 貼壁生長

特征特性: 該細胞系衍生自WI-38細胞。WI-38細胞感染低滴度的SV40病毒,經過連續(xù)傳代、選擇獲得多株亞系,其中2RA亞系含有SV40neo(T)和轉移抗原,從而改變其有限細胞系的特性,可在常規(guī)條件下連續(xù)傳代。該細胞系的實驗操作甚少在生物安全P2級條件下進行。

培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代

傳代情況: C265

凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測: 陰性
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冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經過鉻酸洗液處理; 
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

人伯基特淋巴瘤拉丁屬名: Escherichia  coli4-氨基-7-(三氟甲基)喹啉Human PTCH1 ELISA Kit
大鼠骨肉瘤拉丁屬名: Monilinia fructicola 4-氨基-7-(三氟甲基)喹啉Human PTCH2 ELISA Kit
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肺腺癌用途: 藥用十二Human PTBP1 ELISA Kit
小肺癌拉丁屬名: Mucor genevensis苯酸頻哪酯Human PTBP2 ELISA Kit
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人結直腸腺癌(半貼壁)用途: 與胡枝子共生固氮烯酸二甲基氨基乙酯Human PTCH1 ELISA Kit
人盲腸腺癌拉丁屬名: Yarrowia lipolytica烯酸二甲基氨基乙酯Human PTCH2 ELISA Kit
綠色熒光蛋白標記人注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用3-溴苯甲酸乙酯Human PSME4 ELISA Kit
人內膜腺癌拉丁屬名: anatipestifer3-溴苯甲酸乙酯Human PSME3 ELISA Kit
人內膜拉丁屬名: Aspergillus ustus1-己基-3-甲基咪唑四氟酸鹽Human PSMF1 ELISA Kit
人黑色素瘤拉丁屬名: Vibrio mytili1-己基-3-甲基咪唑四氟酸鹽Human PSMG2 ELISA Kit
人皮膚黑色素瘤拉丁屬名: Bacillus  thuringiensis1-辛基-3-甲基咪唑四氟酸鹽Human UBA3(NEDD8-activating enzyme E1 catalytic subunit) ELISA Kit
人眼脈絡膜黑色素瘤拉丁屬

胚肺細胞VA13細胞;WI-38VA13亞系2RA中國藍瓊脂培養(yǎng)基規(guī)格:BR250g詳情介紹

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鹽化鉀溶液規(guī)格:20mL/支 ×18詳情介紹
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的  *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。

 

產品相關關鍵字: 胚肺細胞VA13細胞 WI-38VA13亞系2RA
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