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產(chǎn)品名稱 | 293來(lái)源病毒包裝細(xì)胞；ΦA |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
貨號(hào) | EY-X63449 |
細(xì)胞名稱 293來(lái)源病毒包裝細(xì)胞；ΦA
形態(tài)特性: 上皮樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性:
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:2~1:3傳代。
傳代情況: C3
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 培養(yǎng)法（-）
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產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。
rrIGF-I/IGF-1, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 人胚肺二倍體細(xì)胞；2BS MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)新生牛血清，10%；水解乳蛋白，10%
rrIFN-g, CF (100 UG)細(xì)胞名稱: 人胚肺成纖維細(xì)胞；MRC-5 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)新生牛血清，10%；水解乳蛋白，10%
rrIFN-g (100 UG)細(xì)胞名稱: 抗b雜交瘤細(xì)胞；H10X RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIFN-b (100000 UN)細(xì)胞名稱: 抗雜交瘤細(xì)胞；HN4 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rrIFN-a (100000 UN)細(xì)胞名稱: 人胚腎細(xì)胞；293[HEK-293] DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清，10%
rrICAM-1/CD54/Fc, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆)；CHO-K1 DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)新生牛血清，10%
rrgp130/Fc, CF (100 UG)細(xì)胞名稱: 非洲綠猴腎細(xì)胞；VERO-76 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清，10%
rrGM-CSF, CF (5 UG)細(xì)胞名稱: 人肺癌細(xì)胞；A549[A-549] F12K新生牛血清，10%
rrGM-CSF, CF (25 UG)細(xì)胞名稱: 人胚肺二倍體細(xì)胞；KMB-17 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)新生牛血清，10%；水解乳蛋白，10%
rrGM-CSF (5 UG)細(xì)胞名稱: 人細(xì)胞；HelaS3[HeLaS3] F12K新生牛血清，10%
rrGM-CSF (25 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠骨髓瘤細(xì)胞；Sp2/0-Ag14 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清，10%
rrGHR/Fc, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 非洲綠猴腎細(xì)胞；VERO MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)新生牛血清，10%
rrGFRa-1/Fc, CF (100 UG)細(xì)胞名稱: 抗丙型肝炎病核心抗原單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；HCV-C39 RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清，10%
rrGFRa-1/Fc (100 UG)細(xì)胞名稱: 抗乙型肝炎病表面抗原單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；HBS-r6 RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清，10%
rrGDNF, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 抗丙型肝炎病NS3抗原單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；HCVNS3-57 RPMI1640(w/oHepes)新生牛血清，10%
rrGDNF, CF (10 UG)細(xì)胞名稱: 抗丙型肝炎病NS5抗原單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；NS5 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)新生牛血清，10%
293來(lái)源病毒包裝細(xì)胞；ΦA人前膠原C端肽酶(PCP)ELISA試劑盒LC1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人黑色素瘤相關(guān)抗原(MAGE)ELISA試劑盒LCA/CD45ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人鳥(niǎo)氨脫羧酶(ODC)ELISA試劑盒LCAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人轉(zhuǎn)移因子(TF)ELISA試劑盒LDLELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人纖維母細(xì)胞表面抗原(FSP)ELISA試劑盒LDL-ICELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人胃粘液素(GM)ELISA試劑盒LDLRELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人脫氧核苷(BrdU)ELISA試劑盒LebtospiraIgGELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人鈣離子通道抗體(VGCC)ELISA試劑盒LEPELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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