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大鼠原代膀胱平滑肌原代細胞

商品屬性：

細胞基本屬性：

種屬來源：大鼠

組織來源：膀胱膀胱

生長特性：貼壁生長

產品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%胰蛋bai酶

產品貨期：6周左右

運輸方式：T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應限制：僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用

背景介紹：:大鼠膀胱平滑肌細胞采用胰蛋bai酶-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來。大鼠膀胱平滑肌細胞分離自膀胱組織；膀胱是主要由平滑肌細胞組成的中空器官，膀胱平滑肌的舒張和收縮使得膀胱分別儲存和排出尿液。膀胱平滑肌細胞表型的調控和可誘導一氧化氮合酶的表達與多種病理狀況有關，包括膀胱功能障礙。研究表明，組織缺氧抑制膀胱平滑肌細胞的增殖，膀胱平滑肌細胞的分化依賴于膀胱上皮細胞釋放的因子。膀胱平滑肌細胞外基質的分泌表型可通過細胞所經歷的機械變形頻率而改變。平滑肌是許多疾病中的共同路徑，因此，了解在疾病發(fā)生及持續(xù)過程中平滑肌怎樣變化，這是治療方法取得進展的重要一步。膀胱壁由三層組織組成，由內而外為黏膜層、肌層和外膜。其中，肌層主要由平滑肌構成。膀胱平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。體外培養(yǎng)膀胱平滑肌細胞不僅為組織工程膀胱、尿道提供種植細胞的必要手段，也是研究平滑肌瘤的基礎與前提。

細胞培養(yǎng)操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)

傳代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)

傳代代數可傳5代左右；3代以內狀態(tài)

傳代比例傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法：

1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4.待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。

原代細胞培養(yǎng)的主要步驟包括：

?一、剝離組織，去除外膜、結締組織等?：將組織從動物體中取出，并去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?：使用生理鹽水或其他適當的緩沖液洗滌組織，然后將其剪成約1mm大小的小塊。

三、?用0.1%～0.2%的消化?：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩沖液中，進行消化。消化時間可根據具體實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

?四、吹打分散后，過濾、計數?：將消化后的細胞吹打到一個離心管中，然后過濾、計數。

五、?按30萬/毫升分瓶培養(yǎng)?：將計數后的細胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養(yǎng)。

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