實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
正常乳腺上皮細(xì)胞；MCF10A | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63499 |
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細(xì)胞名稱 正常乳腺上皮細(xì)胞；MCF10A
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性:
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況: 97
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 陰性
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
rmGDF-8 Pro (25 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；MAER-S1 RPMI1640(
鹽酸鹽EHMT1 (E6Q8B) Rabbit mAb嘧啶甲酸
硫酸鹽SignalSilence® cdc2 siRNA I(S)-1-N-BOC-哌甲酸甲酯
腺嘌呤鹽酸鹽PDI (C81H6) Rabbit mAb嘧啶-2-羧酸
；次核苷PDI (C81H6) Rabbit mAb2-氟-甲酸
(標(biāo)準(zhǔn)品)Cortactin Antibody二并[b,f][1,4]硫氮雜卓-11-[10H]酮
5‘-腺嘌呤核苷酸二鈉鹽(AMP2Na)ATF-2 (D4L2X) XP® Rabbit mAb硝基鄰二甲
5‘-腺嘌呤核苷酸二鈉鹽(AMP2Na)ATF-2 (D4L2X) XP® Rabbit mAb2-氨基嘧啶-5-羧酸
5-溴-2’-脫氧尿苷(BRDU)Cortactin (H222) Antibody(甲基)甲酸
胞苷；胞嘧啶核苷TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb環(huán)己基異酸酯
胞嘧啶核苷,胞苷(標(biāo)準(zhǔn)品)TBK1/NAK (D1B4) Rabbit mAb(3aR,4S,5R,6aS)-(-)-六氫-(羥甲基)-2-氧代-2H-環(huán)戊并[b]呋喃-5-基 1,1'-聯(lián)-甲酸酯
dATP,三酸脫氧腺苷鈉鹽AUP1 (D5M9Q) Rabbit mAb反式-(1R,2R)-2-氨基環(huán)戊鹽酸鹽
dGTP;三酸脫氧鳥苷鈉鹽Asymmetric-Methyl-PABP1 (Arg455/Arg460) (C60A10) Rabbit mAb二甲氨基-1-
dCTP;三酸脫氧胞苷鈉鹽Phospho-NDRG1 (Ser330) Antibody JH-M902
dTTP;2‘-脫氧胸苷-5’三酸鈉鹽(dTTP)Sav1 AntibodyL-氨
2‘-脫氧尿苷Brg1 (A52) Antibody2-氨基噻吩-甲酸酯
β-胸苷(dT);2'-脫氧胸苷Brg1 (A52) Antibody2-溴丁酸甲酯
2’-脫氧鳥苷;2'-dGPhospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb (Sepharose®Bead Conjuga)5,6-二氨基脲嘧啶
2‘-脫氧胞苷Phospho-Connexin 43 (Ser368) Antibody溴-2-三氟甲酸
2‘-脫氧胞苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Connexin 43 Antibody2--5-氨基三氟甲
2’-脫氧腺苷Brg1 (P680) Antibody3,5-二氟甲
魚精DNAMLH1 (4C9C7) Mouse mAb2-氟-5-甲酸
鮭魚精DNAMLH1 (4C9C7) Mouse mAb2-IODOPYRAZINE
5-氟脫氧胞苷Phospho-NPM (Thr95) Antibody1-氟萘
5-氟-2‘-脫氧尿苷;氟尿苷Cas9 (7A9-3A3) Mouse mAb (PE Conjuga)2,6-二
鳥苷;核苷Phospho-Keratin 17 (Ser44) Antibody對(duì)基甲
核苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-NPM (Ser4) (D19C1) XP® Rabbit mAb6-甲基吡啶-甲酸
GDPNa2;5’-二酸鳥苷二鈉Phospho-NPM (Ser4) (D19C1) XP® Rabbit mAb(-)-6beta-羥甲基-7alpha-羥基-順式-2-氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛-酮
SU11274Phospho-MDM2 (Ser166) Antibody化釤
尿苷；核苷Phospho-PNK1 (Ser114/Thr118) Antibody7-溴-3,二氫-2H-1-萘酮
核苷,尿苷(標(biāo)準(zhǔn)品)RalB Antibody2-萘酸
UTP;5‘-三酸尿苷三鈉UCHL1 Antibody(2-基)嗎啉
E-64d,蛋白酶抑制劑,阿洛司他丁UCHL3 Antibody(S)-1-N-Boc-2-基哌
2’-脫氧胞苷-5‘-酸二鈉鹽RalA Antibody二對(duì)甲酰
dAMP;2’-脫氧腺苷-5‘-單酸AMPK Substra Antibody Sampler Kit2-氟基
黃素腺嘌呤二核苷酸二鈉鹽Ezh2 (AC22) Mouse mAb (PE Conjuga)羥甲基咪唑鹽酸鹽
己烷雌酚(標(biāo)準(zhǔn)品)CD31 (PECAM-1) (89C2) Mouse mAb2-氟-6-甲
正常乳腺上皮細(xì)胞；MCF10A人SH2攜帶蛋白(SHC/SLP-76)ELISA試劑盒OCTELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人T細(xì)胞活化連接蛋白(LAT)ELISA試劑盒ODCELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人降解加速因子(DAF)ELISA試劑盒ODFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人原鈣黏素1(PCDH1)ELISA試劑盒ODFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA試劑盒OFQ/NELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人結(jié)合蛋白(RBP)ELISA試劑盒OFQ/NELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CyPB)ELISA試劑盒OFQ/NELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒OGPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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